ДНК-лигаза Т4, в низкой концентрации, 1 ед/мк,2х500 единиц

ДНК-лигаза Т4 катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5’-фосфорилированным и 3’-гидроксилированным концами двух фрагментов двойной цепи ДНК или РНК. Фермент восстанавливает однонитевые разрывы в двойных цепях ДНК, РНК или гибридов ДНК/РНК. ДНК-лигаза сшивает как липкие, так и тупые концы, но не однонитевые нуклеиновые кислоты. В качестве кофермента требуется наличие АТФ. ДНК-лигаза Т4 от Thermo Scientific активна в рестриктазных буферах, лигазном буфере и буфере для обратной транскрипции. Реакция лигирования липких концов происходит в течение 10 минут при комнатной температуре. Для лигирования тупых концов в комплект входит раствор полиэтиленгликоля. Области применения: Клонирование фрагментов ДНК или ПЦР-фрагментов в вектор после рестрикции; пришивка олигонуклеотидных линкеров и адапторов к ДНК; лигазная детекция РНК ; репарация 1-цепочечных разрывов в двухцепочечных молекулах нуклеиновых кислот; циркуляризация линейной ДНК. ДНК-лигаза Т4 Thermo Scientific комплекутется 10-кратным лигазным буфером и 50% растворов ПЭГ. Активность ДНК-лигазы может измеряться в единицах лигирования липких концов (лигирование 50% HindIII-фрагментов ДНК фага в течение 30 минут) или в единицах Вейсса (каталитическое превращение 1 нмоль дифосфата в течение 20 минут). 1 единица Вейса равна 200 единицам лигирования липких концов. Важно! 1) Связывание лигазы с ДНК може приводить к смещению полос в агарозном геле. Во избежание подобного смещения рекомендуется добавлять к электрофорезным образцам буфер для нанесения с SDS и инкубировать образцы в течение 10 минут при +65оС, а затем охладить во льду. 2) При электротрансформации лигазной смеси необходимо произвести очистку ДНК от фермента (на спин-колонках или фенол-хлороформной экстракцией) Условия хранения: -20оС